Glutamine好,GlutaMAX更好 的秘密

L-glutamine 為培養基中提供細胞氨基酸來源之添加物。L-glutamine參與細胞內purine嘌呤和pyrimidine nucleotides嘧啶核苷酸,amino sugars氨基糖,glutathione穀胱甘肽,L-glutamate谷氨酸和其他氨基酸的形成,以及蛋白質合成和葡萄糖生成。

與大多數其他氨基酸不同,L-glutamine在溶液中不穩定,容易自發性地降解,或受到溫度和pH值變化影響而降解,進而產生對細胞具有毒性的氨副產物,影響細胞之蛋白質的醣基化模式和細胞活性,並且降低蛋白質產生效率。

Gibco GlutaMAX是作為L-glutamine更穩定的替代品。GlutaMAX是L-glutamine的衍生物,由L-alanine-L-glutamine構成之二肽,在水溶液中更穩定並且不會自發降解。 當細胞在含有GlutaMAX補充劑的培養基中培養時,細胞逐漸釋放aminopeptidases水解GlutaMAX,將L-alanine和L-glutamine緩慢釋放到培養基中,然後L-alanine和L-glutamine可被細胞吸收並用於蛋白質生產或TCA循環。

比較GlutaMAX與L-glutamine的穩定性,將DMEM media分別添加GlutaMAX與L-glutamine分裝後,放置37°C下保存,每天取樣連續一週,取樣之樣本保存於–20°C冷凍,最後通過HPLC測定GlutaMAX與L-glutamine與氨含量。結果顯示GlutaMAX 在37°C下穩定存在並且不會自發降解,GlutaMAX含量幾乎不受溫度影響,且多天後只產生極低量之有毒性的氨副產物;而L-glutamine受到溫度影響在溶液中不穩定,會自發性地降解,檢測L-glutamine含量日漸下降,且有毒性的氨副產物含量日漸上升。

將MDBK細胞1 x 10^5 種於25 cm2 T-flasks 中,使用DMEM分別添加10%FBS與GlutaMAX或L-glutamine 培養MDBK細胞株,觀察七天內細胞數變化,結果顯示media中含有GlutaMAX添加物在第一到四天之細胞數穩定成長,並在四天後維持穩定細胞數;而media中含有L-glutamine添加物在第一到四天之細胞數也是穩定成長,但在第四天後細胞數急速下降。

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