壓1秒就燒片、壓1天沒訊號? ECL substrate這麼多怎麼找?

 

不知道大家是否有這樣的困擾呢?西方墨點實驗連做了2-3天,已經來到最後一哩路,壓完片就可以交作業下班了,沒想到有的樣品才壓一秒就燒片,還有的壓了一整天都沒訊號,花了許多時間與心血,還是得不到漂亮的結果(心好累)…

大家是否知道ECL(Enhanced chemiluminescent)效能也會影響實驗結果呢?其實ECL有各種靈敏度等級,只要針對實驗需求選對等級,不只能使實驗順暢,在提升實驗成功率之下,也可節省反覆測試的試劑、抗體消耗的經費呢!

除了四月份新品資訊我們介紹了SuperSignal West Atto之外,本期指南讓我們協助大家更深入了解SuperSignal系列產品,從CP值超高的West Pico Plus(簡稱Pico Plus),到高靈敏度的West Femto(簡稱為Femto),以實測資料與大家分享,讓大家更知道怎麼找到合適產品。

 

※Pico Plus實測結果

各Cell Lysate進行兩倍序列稀釋,以各目標蛋白抗體進行西方墨點法測試訊號靈敏度

 

上圖為以HeLa Cell Lysate進行兩倍序列稀釋,以西方墨點法偵測STAT3蛋白質表現量,比較與他牌ECL訊號持久度

 

 

Pico Plus與他廠同級產品相比,訊號靈敏度與持久度表現都是最佳,是實驗室日常需求的ECL可靠選擇!

 

※Femto實測結果

上圖使用NIH3T3 cell lysate(10ug)進行兩倍序列稀釋,偵測Erk-1蛋白表現,比較各廠ELC靈敏度表現差異

 

由實測資料顯示,Femto可支援高靈敏度的實驗需求,且靈敏度與訊號持久度亦為測驗中表現最佳組別。

除了Atto或Pico Plus之外,Thermo Fisher還開發了各式不同效能的ECL,為協助大家的實驗進行,本期選擇指南特別針對產品效能進行整理比較,如果各位也遇到訊號不佳問題,不妨參考我們的選擇指南唷!

 

上述實驗樣品為HeLa cell lysate,樣品由10ug起始進行兩倍序列稀釋,以西方墨點法偵測p23蛋白表現

更多HRP Substrate偵測靈敏度請見技術文件連結: Guide to enzyme substrates for Western blotting

 

原廠也提供的網頁小工具,按照步驟就可以找到最適用的ECL囉!

Western Blot Chemiluminescent Substrate Selection Guide

 

※訊號太弱、背景太雜,除了更換ECL,你還可以選擇:

SuperSignal™ Western Blot Enhancer:
可用於轉漬濾膜與一抗稀釋液,能將敏感度提高3-10倍,並有效降低背景雜訊

上圖樣品為K625 cell lysate序列稀釋,並偵測ERK1表現量

希望本期的指南能夠協助到各位科學家找到最有效的工具,有任何問題都歡迎使用留言工具或是洽詢當區業務專員,我們下次見!

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