活細胞影像應用

Characterizing Calcium Mobilization using Kinetic Live Cell Imaging

鈣離子Ca2+在訊息傳遞路徑中,一直扮演著很重要的次級訊息傳遞者。當細胞接收到外界訊號時,為了能快速地將訊息往下傳遞到下游,必須借助鈣離子將訊號往下傳遞。因此鈣離子的濃度變化,可以視為訊息傳遞路徑的活化與否。鈣離子濃度的變化非常快速,偵測時需要搭配使用高時間分辨率之儀器。這裡我們使用BioTek LionheartTM FX活細胞影像系統搭配CO2/O2氣體控制器與自動分注系統,使用Fluo-4 Ca2+鈣離子指示劑做活細胞快速動力學之偵測。

Lionheart™ FX Automated Live Cell Imager

自動化活細胞影像儀,可進行明視野、相位差、彩色明視野與螢光的自動化影像拍攝。儀器支援37 °C溫度控制,CO2/O2氣體控制以及自動分注系統。非常適合長時間活細胞影像觀察及快速動力學影像拍攝等應用。

螢光染劑

使用FLuo-4鈣離子指示劑,在鈣離子存在的情況下,可使用469/525 (GFP)的螢光濾鏡做影像擷取。

鈣離子螢光影像拍攝與定量

Lionheart FX自動化活細胞影像系統,可在毫秒內進行影像拍攝。使用4X物鏡,於單孔中自動分注20μL之DPBBS (控制組)或60 μM ATP,分注後立刻以3 fps (Frame per second)之速度進行螢光影像拍攝,並持續拍攝30秒。拍攝完的圖片可使用Gen5TM軟體之Mask功能進行螢光強度定量。

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